结果
1、内源性Mmut表达和报告基因转导在中枢神经系统的表达首先对野生型小鼠组织中的天然Mmut表达进行了研究，确定在各种组织和细胞类型中的相对表达。通过从一个野生型杂合子Mmut+/-小鼠断奶时收集了大脑、肝脏、肾脏、心脏和骨骼肌。RNA原位杂交显示，在所有被研究的大脑区域，包括纹状体、脉络丛、海马、中脑、桥脑、丘脑和大脑皮层，都有天然的Mmut表达。一项对非中枢神经系统组织的调查显示，在肾脏和肝脏中天然的Mmut表达最高，骨骼肌和心肌中存在较低的水平，这与以前研究中的Mmut蛋白分析一致。然后使用AAV报告载体来研究中枢神经系统转导，并指导治疗性载体的设计。Mmut-/-，TgINS-MCK-Mmut,Mmut+/-同窝小鼠在出生时通过眶后窦注射AAV-eGFP，并于21天收集组织检测。通过eGFP在大脑、小脑、纹状体、脉络丛、海马、丘脑、下丘脑和桥脑等特定脑区的表达来量化AAV转导。结果显示：整个转导在脉络膜丛中最为明显。以相同方式处理的另一组小鼠的脑组织，同时染色GFP和神经元标记物NeuN，PHP.eB和AAV9载体也在纹状体中引导GFP的转基因表达。基因型对GFP+/NeuN+细胞的分布无显著影响。2、甲基丙二酸血症小鼠模型中MMUT基因的AAV传递:生物分布、表达和代谢效应基于CaMKII-GFP载体对CNS的良好转导，以及与内源性Mmut表达的比对，制备了PHP.eB-CaMKII-MMUT载体使用与载体相同剂量和途径治疗Mmut-/-，TgINS-MCK-Mmut,Mmut+/-同窝小鼠。Mmut-/-，TgINS-MCK-Mmut小鼠在PHP.eB-CaMKII-MMUT处理后，RNA原位杂交显示外源性AAV-MMUT在脑区域中表达，MMUT的表达在包括腹侧纹状体和下丘脑在内的大脑腹侧区域最为明显；肝组织中未检测到MmutRNA的表达。血浆中疾病代谢产物甲基丙二酸和2-甲基柠檬酸在被治疗的MMA小鼠血清中显著降低。讨论
SPRING
文中的实验表明，嗜中枢神经系统的AAV载体可以在严重甲基丙二酸血症小鼠模型中恢复Mmut在中枢神经系统的表达。使用CaMKII神经特异性启动子，Mmut表达的恢复仅限于中枢神经系统，特别是那些被认为与疾病进展有关的大脑区域，如纹状体和脉络膜丛的血脑屏障的代谢。全身*性代谢物水平的下降，以及仅局限于中枢神经系统的Mmut表达，支持了AAV介导的中枢神经系统基因治疗可能有利于甲基丙二酸血症患者的看法；将来甚至对那些接受过肝移植的人，也能提供神经保护。
小鼠模型显示基因治疗有望治疗结节硬化对内视网膜的基因治疗有望治疗失明基因组编辑技术在遗传性视网膜营养不良基因治疗中的应用神经退行性疾病的基因治疗基因疗法有助于减轻高脂饮食引起的代谢性炎症和创伤后关节炎10年丰富临床服务经验分子遗传学检验领导品牌提供全技术平台解决方案基于人工智能的生物信息分析体系内容丰富贴近临床的检测报告业内最短的报告周期专业的遗传咨询服务体系北京康旭医学检验所海淀区杏石口路益园文创基地C区10号楼-转